Neural Differentiation Medium神經(jīng)分化培養(yǎng)基NDiff 227

Neural Differentiation Medium神經(jīng)分化培養(yǎng)基NDiff 227（Y40002）是一款成分確定、無(wú)血清、包含N2 & B27添加劑的*培養(yǎng)基，用于將單層貼壁生長(zhǎng)的小鼠胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)方向分化¹。該款培養(yǎng)基上市時(shí)間超過(guò)10年，一共有超過(guò)47篇文獻(xiàn)使用。

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產(chǎn)品特征-Neural Differentiation Medium NDiff 227

成分確定、無(wú)血清的*培養(yǎng)基。

經(jīng)典配方，添加N2,B27。

只作用于小鼠細(xì)胞，有效促進(jìn)小鼠胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)方向分化。

添加其他因子后，可以維持人/小鼠干細(xì)胞培養(yǎng)。

圖一：分化培養(yǎng)中細(xì)胞形態(tài)變化

小鼠胚胎干細(xì)胞，在使用NDiff 227培養(yǎng)基單層貼壁培養(yǎng)后，分化為神經(jīng)細(xì)胞。

圖二：分化培養(yǎng)產(chǎn)物表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物Nestin和TUJ1

應(yīng)用-Neural Differentiation Medium NDiff 227

單層貼壁培養(yǎng)下小鼠胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化。

單層貼壁條件下的胚胎干細(xì)胞維持培養(yǎng)。

文庫(kù)篩選化合物。

神經(jīng)分化的生物特性和功能性的研究與評(píng)價(jià)。

當(dāng)添加如Ying QL et al. (2003)文章中的添加劑，Neural Differentiation Medium NDiff 227可以支持小鼠胚胎干細(xì)胞無(wú)血清、無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)²。

Neural Differentiation Medium NDiff 227添加生長(zhǎng)因子，可以用于成功培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞系^{3, 4}。

當(dāng)添加FGF后，無(wú)血清的Neural Differentiation Medium NDiff 227培養(yǎng)基可以將小鼠胚胎干細(xì)胞分化為早期的定型內(nèi)胚層細(xì)胞（Anterior Definitive Endoderm，ADE）前體，該前體可以高效分化為肝臟細(xì)胞和胰腺細(xì)胞⁵。

保存-Neural Differentiation Medium NDiff 227

-20℃保存，保質(zhì)期一年。融化后，4℃避光保存，4周內(nèi)使用。

使用方法-Neural Differentiation Medium NDiff 227

使用前準(zhǔn)備：培養(yǎng)基避光水浴解凍，*解凍前轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基防止被加熱，再接著柔力混合解凍全部培養(yǎng)基。也可以避光4℃解凍。如果出現(xiàn)沉淀，4℃過(guò)夜放置使沉淀*溶解。培養(yǎng)基有可見(jiàn)沉淀時(shí)不能使用，要確保使用前已經(jīng)*溶解。

單層貼壁培養(yǎng)下的小鼠胚胎干細(xì)胞神經(jīng)分化：

1.在明膠包被的塑料培養(yǎng)器皿中，添加NDiff 227培養(yǎng)基，接種早期傳代的胚胎干細(xì)胞，接種密度：2.5 - 10 x 10³ cells/cm²。

2.每一兩天更換培養(yǎng)基。神經(jīng)分化早期預(yù)計(jì)會(huì)出現(xiàn)胚胎干細(xì)胞死亡造成的污染。

3.通過(guò)細(xì)胞形態(tài)和神經(jīng)元標(biāo)記物染色監(jiān)控神經(jīng)元分化。培養(yǎng)4-6天后，神經(jīng)分化表現(xiàn)明顯，7-9天后神經(jīng)元成熟。

歡迎您致電咨詢(xún)Neural Differentiation Medium NDiff 227 華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司  ：152 1681 4001。華雅再生醫(yī)學(xué)-客服: 316 808 6348

背景知識(shí)

從胚胎干細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞直接分化成神經(jīng)細(xì)胞需要進(jìn)行培養(yǎng)基優(yōu)化保證結(jié)果的可靠性。

Neural Differentiation Medium NDiff 227，神經(jīng)細(xì)胞分化的有效誘導(dǎo)培養(yǎng)基，通過(guò)使用傳統(tǒng)配方再添加N2和B-27，可以進(jìn)行簡(jiǎn)單高效的神經(jīng)分化。

1. 為什么研究“體外干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化"？

· 有一類(lèi)病叫做神經(jīng)退行型疾病，常見(jiàn)的包括阿爾茨海默病、帕金森病。神經(jīng)退行性疾病的一個(gè)很顯著的現(xiàn)象就是腦細(xì)胞的消亡減少和腦細(xì)胞正常功能的喪失。

· 干細(xì)胞治療的概念在治療神經(jīng)退行性疾病的研究中有著很大的吸引力。生物醫(yī)學(xué)研究者的大概設(shè)想是，在體外（如細(xì)胞培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)瓶）把干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化成為神經(jīng)細(xì)胞，獲得這些從干細(xì)胞分化來(lái)的神經(jīng)細(xì)胞后，把他們重新注射回到病人的腦部。這些注射回去的干細(xì)胞替代那些病人原來(lái)的不正常的干細(xì)胞，從而使得病人的癥狀得到緩解。

· 體外能夠把干細(xì)胞誘導(dǎo)分化出神經(jīng)細(xì)胞是干細(xì)胞治療zui為基礎(chǔ)的步驟。在2003年前的這方面的研究中，有兩個(gè)條件被認(rèn)為二者必?fù)?jù)其一（只考慮貼壁培養(yǎng)干細(xì)胞的方式）：*，認(rèn)為干細(xì)胞生長(zhǎng)后形成好多細(xì)胞聚集在一起的（多層細(xì)胞）集落，是干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞方向分化的必要條件；第二，認(rèn)為與其他飼養(yǎng)層細(xì)胞共同培養(yǎng)是必須的（哺乳動(dòng)物細(xì)胞貼壁培養(yǎng)時(shí)，使用飼養(yǎng)層細(xì)胞來(lái)支持或滋養(yǎng)干細(xì)胞生長(zhǎng)）。但是按照這樣的條件，在培養(yǎng)中會(huì)造成一個(gè)很大的問(wèn)題，即無(wú)法做到標(biāo)準(zhǔn)化地誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞。簡(jiǎn)單地說(shuō)，就是似乎是*同樣的實(shí)驗(yàn)條件，但是分化誘導(dǎo)的結(jié)果大不相同。這樣，是無(wú)法將獲得的神經(jīng)細(xì)胞用于后續(xù)的回輸實(shí)驗(yàn)的，因?yàn)閮纱螌?shí)驗(yàn)回輸?shù)募?xì)胞在生理狀態(tài)上有明顯的差別。

· 因此，發(fā)現(xiàn)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化的、少用外源因子（飼養(yǎng)層細(xì)胞是使用很多的外源因子）的方法，是“體外干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化"工作者必須解決的難題。

2. RHB-A和Neural Differentiation Medium NDiff 227培養(yǎng)基介紹

· 在2003年前，研究者發(fā)現(xiàn)在貼壁培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí)，需要加入兩種因子去誘導(dǎo)干細(xì)胞分化成為神經(jīng)細(xì)胞，即N2和B27，其中Cellartis有N2添加劑。這兩種因子現(xiàn)在已經(jīng)成為神經(jīng)分化實(shí)驗(yàn)中*的角色。

· 在2003年，蘇格蘭干細(xì)胞研究所的研究人員在Nature雜志上發(fā)表了一篇重要的研究報(bào)道，他們證明：

1）貼壁培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞時(shí)，加入N2和B27后，超過(guò)半數(shù)的干細(xì)胞分化成為了神經(jīng)前體細(xì)胞；

2）這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，干細(xì)胞不形成聚落，單層生長(zhǎng)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)中外源因子很少，高度可控。因此，這個(gè)實(shí)驗(yàn)成為了體外誘導(dǎo)分化干細(xì)胞成為神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案。這個(gè)培養(yǎng)基，就是Cellartis的Neural Differentiation Medium NDiff 227培養(yǎng)基。（conversion of embryonic stem cells into neuroectodermal precursors in adherent monoculture）。

· 2008年，Cellartis在Ndiff227培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上做了改進(jìn)，研發(fā)出RHB-A培養(yǎng)基。葡萄牙的研究團(tuán)隊(duì)比較了Ndiff227和RHB-A兩種培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)貼壁培養(yǎng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化神經(jīng)細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，使用RHB-A培養(yǎng)基，形成神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)量比使用Ndiff227的情況多出10%以上。

· RHB-A和Ndiff227廣泛應(yīng)用于美國(guó)與歐州國(guó)家的科研實(shí)驗(yàn)中，有多篇文獻(xiàn)可作為參考。

Neural Differentiation Medium NDiff 227僅供科研使用。

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