你知道凝膠電泳的分類有哪些么
1、瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳
瓊脂糖(Agarose)是一種線性多糖聚合物,是從紅色海藻產(chǎn)物瓊脂中提取而來的。當(dāng)瓊脂糖溶液加熱到沸點后冷卻凝固便會形成良好的電泳介質(zhì),其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。經(jīng)過化學(xué)修飾的低熔點(LMP)的瓊脂糖,在結(jié)構(gòu)上比較脆弱,因此在較低的溫度下便會熔化,可用于DNA段的制備電泳。
聚丙烯酰胺凝膠主要有兩種方式:一是用于分離和純化雙鏈DNA段的非變性聚丙烯酰胺凝膠。在未變凝膠中分離DNA的缺點是DNA的遷移率受堿基組成和序列的影響。由于無法得知未知DNA的遷移是否反常,故不能用未變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳確定雙鏈DNA的大小。二是用于分離及純化單鏈DNA段的變性聚丙烯酰胺凝膠。這類聚丙烯酰胺凝膠是在核苷酸堿基配對抑制劑(尿素或甲酰胺)的存在下聚合而成,變性DNA的移動速度同其堿基組成及序列幾乎*無關(guān),故可用于分離及純化單鏈DNA段和DNA測序等。
2、脈沖電場凝膠電泳
普通的凝膠電泳技術(shù)顯然是無法分離如此超大分子量的DNA分子的。
1984年,D.C.Schwartz和C.R.Cantor發(fā)明的脈沖電場凝膠電泳(Pulsed-FieldGelElectrophoresis,PFGE)技術(shù),可以成功地用來分離整條染色體這樣的超大分子量的DNA分子。在常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳中,超過一定大小范圍的所有的雙鏈DNA分子,都是按相同的速率遷移的。這是因為它們在單向恒定電場的作用下,僅以"一端向前"的方式游動穿過整個膠板。而在脈沖電場中,DNA分子的遷移方向是隨著所用的電場方向的周期性變化而不斷改變的。
在標(biāo)準(zhǔn)的PFGE中,頭一個脈沖的電場方向與核酸移動方向成45°夾角,而下一個脈沖的電場方向與核酸移動方向在另一側(cè)亦成45°夾角。由于加壓在瓊脂糖凝膠上的電場方向、電流大小及作用時間都在交替地變換著,這就使得DNA分子能夠隨時地調(diào)整其游動方向,以適應(yīng)凝膠孔隙的無規(guī)則變化。與分子量較小的DNA分子相比,分子量較大的DNA分子需要更多的次數(shù)來更換其構(gòu)型和方位,以使其可以按新的方向游動。因此,在瓊脂糖介質(zhì)中的遷移速率也就顯得更慢一些,從而達到分離超大分子量DNA分子的目的。應(yīng)用脈沖電場凝膠電泳技術(shù),可成功地分離到分子量高達10bp的DNA大分子。